Em química, a diluição é o processo de redução da concentração de uma substância em uma solução. A diluição da cadeia é a diluição repetida de uma solução para aumentar rapidamente o fator de diluição. Este procedimento é geralmente realizado em experimentos que requerem soluções muito diluídas com alta precisão. Por exemplo, experimentos envolvendo curvas de concentração em uma escala logarítmica ou experimentos para determinar a densidade de bactérias. As diluições de cadeia são amplamente utilizadas em experimentos científicos, como bioquímica, microbiologia, farmacologia e física.
Etapa
Método 1 de 2: Realização da diluição básica
Etapa 1. Determine a solução diluente apropriada
É muito importante determinar o líquido a ser usado para diluição. Muitas soluções são solúveis em água destilada, mas nem sempre é o caso. Se você estiver diluindo bactérias ou outras células, faça-o em um meio de cultura. O líquido que você escolher será usado para todas as diluições da cadeia.
Em caso de dúvida sobre qual diluente usar, procure ajuda ou procure na Internet. Procure exemplos de outras pessoas que fizeram diluições de cadeia semelhantes
Etapa 2. Prepare uma série de tubos de ensaio contendo 9 mL de diluente
Os tubos de ensaio são usados para diluições vazias. Primeiro, coloque a amostra não diluída no primeiro tubo e, em seguida, faça as diluições em sucessão para os próximos tubos.
- Identifique todos os tubos usados antes de iniciar a diluição para não se confundir quando o experimento estiver em execução.
- Cada tubo será preenchido com 10 diluições, a partir do tubo cuja substância não foi diluída. A diluição no primeiro tubo é 1:10, seguida por 1: 100 no segundo tubo, 1: 1000 para o terceiro e assim por diante. Determine a quantidade de diluição que deve ser feita com antecedência, para não desperdiçar a solução diluente.
Etapa 3. Prepare um tubo de ensaio contendo pelo menos 2 mL de solução não diluída
A quantidade mínima de solução a ser diluída necessária para realizar esta diluição da cadeia é 1 mL. Se você usar apenas 1 mL, não haverá solução não diluída restante. Etiquete BLM para soluções não diluídas.
Misture bem a solução antes de iniciar qualquer diluição
Etapa 4. Faça a primeira diluição
Pegue 1 mL da solução não diluída do tubo de ensaio BLM com uma pipeta e coloque-o em um tubo de ensaio rotulado 1:10 contendo 9 mL de diluente, a seguir misture bem. Agora há 1 mL da solução não diluída em 9 mL do diluente. Assim, a solução foi diluída por um fator de diluição de 10.
Etapa 5. Faça a segunda diluição
Para a segunda diluição, pegue 1 mL da solução do tubo 1:10 e coloque no tubo 1: 100 que também contém 9 mL do diluente. Certifique-se de que a solução no tubo 1:10 esteja completamente misturada antes de adicioná-la ao próximo tubo. Novamente, certifique-se de que a diluição no tubo 1: 100 esteja completamente misturada. A solução do tubo 1:10 foi diluída 10 vezes no tubo 1: 100.
Etapa 6. Continue este procedimento para realizar diluições de cadeia mais longas
Este processo pode ser repetido quantas vezes forem necessárias para obter a concentração desejada da solução. Em experimentos usando curvas de concentração, você pode realizar diluições em cadeia para produzir várias soluções com diluições de 1, 1:10, 1: 100, 1: 1.000.
Método 2 de 2: Calculando o Fator de Diluição e a Concentração Final
Etapa 1. Calcule a proporção da última diluição na diluição da cadeia
A razão de diluição total pode ser determinada multiplicando o fator de diluição de cada etapa para a etapa final. A ilustração matemática é com a fórmula Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , Dt é o fator de diluição total e D é a proporção do diluente.
- Por exemplo, digamos que você faça uma diluição de 1:10 4 vezes. Insira o fator de diluente na fórmula: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- O fator de diluente no quarto tubo nesta diluição em cadeia é 1: 10.000. A concentração da substância após a diluição é 10.000 vezes menor do que antes de ser diluída.
Etapa 2. Determine a concentração da solução após a diluição
Para determinar a concentração final de uma solução após uma diluição em cadeia, você deve saber sua concentração inicial. A fórmula é Cfim = Ccomeço/ D, Cfim é a concentração final da solução diluída, Ccomeço é a concentração inicial da solução original e D é a proporção de diluição predeterminada.
- Por exemplo: se você começar com uma solução de células cuja concentração é 1.000.000 células por mL e a razão de diluição é 1.000, qual é a concentração final da amostra diluída?
-
Usando a fórmula:
- Cfim = Ccomeço/ D
- Cfim = 1.000.000/1.000
- Cfim = 1000 células por mL.
Etapa 3. Certifique-se de que todas as unidades são iguais
Ao realizar qualquer cálculo, certifique-se de que as unidades sejam sempre as mesmas no final do cálculo. Se a unidade inicial for células por mL, certifique-se de que as unidades permanecem as mesmas no final do cálculo. Se a concentração inicial for partes por milhão (bpd), então a concentração final também deve ser em unidades bpj.
